重庆雷鸟生物科技有限公司

多糖多酚植物叶片直接PCR试剂盒—防PCR产物污染体系

产品介绍

本产品采用独特的裂解缓冲液体系，能够快速的从多糖多酚含量高的植物(如：棉花、香蕉等)叶片样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应。裂解缓冲液处理叶片时，叶片无需研磨或剪碎处理，因此特别适合大规模基因检测。

裂解缓冲液释放基因组DNA过程可以在5-10min内完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代谢产物的过程，即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。

2× Leaf PCR Easy^TM Mix具有很强的PCR反应抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解产物为模板，进行高效特异性扩增。该试剂包含公司专门针对直接PCR反应改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂。与直接裂解液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。

2× Leaf PCR Easy^TM Mix(UNG)在2× Leaf PCR Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(racil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。

D-Taq DNA polymerase是为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。

根据植物样本差异，该产品分为两个大类：植物直接PCR试剂盒(Plant Leaf Direct PCR Kit)和多糖多酚植物直接PCR试剂盒(Plant LeafDirect PCR Plus Kit)；在PCR检测阶段，可以根据实验需求，选用普通的2× Leaf PCR Easy^TM Mix或是具有防PCR扩增产物污染作用的2× Leaf PCR Easy^TM Mix(UNG)。

试剂盒应用

适用范围：多种植物叶片。

样本裂解释放的DNA：仅用作PCR模板。

试剂盒可用于以下用途：转基因植株鉴定、植物基因分型等。

试剂盒局限性

扩增片段≤1kb；超过1kb，扩增效率下降或者扩增失败。

PCR产物可能会有点突变，如用于基因克隆，请知悉。

UNG防PCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。

PCR产物3’末端随机加A尾。

试剂盒内容

Buffer PS1：提供植物叶片裂解反应所需的环境。

Buffer PS2：补充提供多糖多酚植物叶片裂解反应所需的环境。

Buffer P2：中和裂解产物，使其不影响后续PCR反应。

2× Leaf PCR Easy^TM Mix(UNG)：在2× Leaf PCR Easy^TM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶，从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-TaqDNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时，只需将适当的裂解混合液、引物、ddH₂O添加到2×Leaf PCR Easy^TM Mix(UNG)中即可用于PCR反应。

6× DNA Loading Buffer：该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时，配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光，影响实验结果。

储存条件

全程低温冰盒运输，保证试剂盒Part I、Part II处于＜4℃状态。

本试剂盒Part I保存在2-8℃。

v试剂Buffer PS1、Buffer P2、6× DNA Loading Buffer在干燥条件下，可保存12个月；如需保存更长时间可置于2–8℃。

本试剂盒Part II保存在-20℃。

v   试剂Buffer PS2、2× Leaf PCR Easy^TM Mix(UNG)，在-20℃条件下可保存12个月；若频繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。

操作流程