EDTA抗凝血直接PCR试剂盒—防PCR产物污染体系
无需进行费时而昂贵的DNA纯化,无需预处理,直接使用全血作为PCR模板。
体系扩增能力强,可以灵敏的检测出血液中基因组和外源目的DNA片段。
2× SuperEasyTM Mix(UNG)-EDTA血液耐受度高:人血可达45%,鼠血可达20%。
样本全封闭式操作,无需担心样本污染和PCR结果假阳性。
防污染PCR体系2× SuperEasyTM Mix(UNG)-EDTA,有效消除由PCR产物所引起的污染,保证扩增的特异性和准确性。
产品介绍
本产品采用独特的PCR缓冲液体系,无需DNA提取或样品处理即可以全血样本为模板进行直接PCR。EDTA、Heparin抗凝全血以及含有血液的采集卡(如Whatman 903®和 FTA®采血卡)均可直接用于PCR扩增鉴定,极大的缩短了检测时间。本试剂盒提供的2× SuperEasyTM Mix具有很强抑制物耐受性,人血作为PCR模板最大加入量可达PCR体系的45%,鼠血的可达20%,可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。
2× SuperEasyTM Mix-EDTA包含本公司特有的Foregene D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、Taq Reaction Buffer、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂。
2× SuperEasyTM Mix(UNG)在2× SuperEasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响,从而保证扩增的特异性和准确性,防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。
D-Taq DNA polymerase是Foregene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA,扩增速度可达2Kb/min,特别适合进行直接PCR反应。
根据所用抗凝剂的不同,该产品分为两个大类:EDTA抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-EDTA)和Heparin抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-Heparin);也可以根据实验需要选择相应的试剂盒。
试剂盒应用
该试剂盒专用于EDTA抗凝全血直接PCR鉴定。(包括:人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等)。
试剂盒局限性
扩增片段≤1kb;超过1kb,扩增效率下降或者扩增失败。
PCR产物可能会有点突变,如用于基因克隆,请知悉。
UNG防PCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。
PCR产物3’末端随机加A尾。
试剂盒内容
2× SuperEasyTM Mix(UNG)-EDTA:在2× SuperEasyTM Mix-EDTA的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶,从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时,只需将适当的抗凝全血、引物、ddH2O添加到相应的2× SuperEasyTM Mix(UNG)-EDTA中即可用于PCR反应。
6× DNA Loading Buffer:该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时,配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer,以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer,否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光,影响实验结果。
储存条件
全程低温冰盒运输,保证试剂盒处于<4℃状态。
本试剂盒保存在-20℃。
v 2× SuperEasyTM Mix(UNG)-EDTA,若频繁使用,也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。
v 6× DNA Loading Buffer,可置于4℃或-20℃长期保存。
操作流程